Este blog pertenece a alumnas de la Escuela Técnica ORT. En él se irá exponiendo semana a semana el desarrollo del Proyecto Final. Hoy, jueves 3 de abril de 2008, lo damos por inaugurado.
Hoy volvimos a hacer PCR. Vimos las diferencias en los resultados si se usa magnesio (izquierda) o se omite su uso (derecha). Mientras esperábamos que el termociclador terminara de trabajar, buscamos información en carpetas que nos prestó Adriana y en una página de Internet recomendada por ella:www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed
En este encuentro hicimos una electroforesis. Primero Adriana nos mostró cómo preparar las placas y preparó el gel. Para el gel usamos un buffer (tristaurinaEDTA), acrilamida con piperazina, etilenglicol, formamida, agua destilada, persulfato y temed. La pipeta que usamos para la acrilamida debió ser descartada porque esta sustancia (sin polimerizar) es muy tóxica. Tuvimos que hacer dos veces el gel porque no gelificaba. Cuando estuvo lista la corrida la llevamos al transiluminador. Adriana nos mostró fotocopias de geles y también algunos geles que tenía guardados y nos llevamos información para fotocopiar.
En este encuentro hicimos PCR, cuyo objetivo es amplificar con primers específicos un fragmento de ADN de interés. Para el mix que le agregamos a las muestras de ADN usamos agua, buffer, DNTP, Mg, primers y TaqPol. Se debe cumplir con determinadas condiciones: · El primer debe tener 18 a 24 pares de bases y no puede tener poliC, poliG, poliA ni poliT. · La temperatura de annealing (hibridación) no puede ser menor de 50ºC y debe ser aproximadamente 5ºC menor que la temperatura de melting. · T. Melting = 4 (G+C) + 2 (A+T). Debe dar entre 40 y 60%.
En esta semana hemos comenzado a trabajar con pacientes que sufren la enfermedad Von Willebrand tipo 2N. Al igual que en el encuentro pasado extrajimos ADN de sangre cruda, utilizando el mismo método. Por falta de tiempo debimos concluir el práctico en esta parte para continuarlo la semana entrante.
